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由原代人细胞重建的空气-血液(肺泡)屏障共培养模型.

海登,P.杰克逊,G.Mankus C.、Oldach J.孩子,米.索兰托,米. Ayehunie,年代. 马泰克公司,美国马萨诸塞州阿什兰01721.
摘要

需要可靠的体外人体模型来研究气道毒性,以推动Tox21的努力,以人类为基础的模型系统取代动物试验. 基于原代人类细胞的体外气道模型已经被描述. 然而,基于动物细胞或人类细胞系的模型仍然是最常用的. 在目前的工作中, 我们描述了从初级人类肺泡上皮细胞衍生的体外空气-血液屏障模型的发展, 肺内皮细胞和单核细胞来源的巨噬细胞. 该模型是通过在微孔膜的下方播种内皮细胞来构建的. 然后在膜的上表面培养肺泡上皮细胞. 继续上皮细胞/内皮细胞共培养,直到出现屏障. 最后,将单核细胞来源的巨噬细胞接种到模型的顶端表面. 采用组织学、免疫组化和透射电镜对三联细胞共培养模型进行表征. 通过测量跨上皮电阻(三通)来评估屏障的形成。. 包括ABC家族外排转运蛋白BCRP在内的药物转运基因的表达, MRP1和MRP2, 有机阳离子摄取转运体OCTN1, RT-PCR检测出OCTN2和OCT3. Macrophage purity was > 95% (CD14+) as assessed by flow cytometry. 共聚焦成像显示细胞角蛋白19和羧肽酶M(肺泡1型细胞标志物)的上皮染色, 以及紧密连接蛋白ZO-1和occludin, 内皮细胞层von Willebrand因子和钙粘蛋白阳性. 细胞追踪器染色显示肺泡腔侧的巨噬细胞. The model developed peak 三通 of > 1,000 Ω x cm2在9-12天内, and maintained 三通 > 400 Ω x cm2 for up to 30 days. 这个新的人体模型系统显示出作为一个有用的工具体外气道毒性和药物-药物相互作用的研究.

关键字

ABC流出转运蛋白, Air-blood障碍, 肺泡组织(alv - 100), 肺泡I型上皮细胞, BCRP, 羧肽酶M, CellTracker染料, 细胞角蛋白19, 钙粘蛋白, 上皮/内皮细胞共培养, 肺模型, MRP1, MRP2, 阻塞, OCT3, OCTN1, OCTN2, 有机阳离子的吸收, 转运蛋白, 愤怒, 表面活性剂蛋白质C, 三通, 紧密连接蛋白, 血管性血友病因子, ZO-1

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