黑色素瘤模型由人类恶性黑色素瘤细胞组成(A375), 正常的, 人源性表皮角化细胞(NHEK)正常, 人来源的真皮成纤维细胞(NHDF)已被培养形成多层, 高分化表皮与黑色素瘤细胞在不同阶段的CM恶性肿瘤. 在文化的不同阶段, 组织表现为径向生长期(RGP)。, 垂直生长期(VGP), 或者转移性黑色素瘤表型. 细胞在使用无血清培养基的细胞培养皿中培养, 并在体外皮肤技术的前沿达到分化水平. 在结构上, 黑色素瘤模型与体内黑色素瘤的发展密切相关, 从而为研究提供了一个有价值的工具, 理解, 并开发预防和治疗最严重的皮肤恶性肿瘤之一.

黑素瘤模型表现出类似活体的形态和生长特征,具有一致性和高度可重复性. 全层皮肤模型的表皮由有组织的基底层组成, 尖尖的, 细粒度的, 角化表皮层与体内发现的相似. 真皮腔室由含有活的正常人类真皮成纤维细胞(NHDF)的胶原基质组成。.

使用黑色素瘤组织的协议是明确和直接的. e世博官方网站的黑色素瘤组织已经被许多靶向和抗黑色素瘤药物使用.

图1

图1. 人体转移性黑色素瘤细胞(A375)全层黑色素瘤皮肤模型. A375细胞在真皮/表皮交界处形成RGP黑色素瘤结节(第11天). 培养时间延长, 黑色素瘤结节采用VGP形态(第18天),随后分离出的细胞群侵袭真皮(转移性侵袭)(第29天). 长箭头表示表皮-真皮交界处的黑色素瘤细胞群. 短箭头显示分离的黑色素瘤细胞簇浸润真皮.

图2

图2. 黑色素瘤FT皮肤模型的超微结构分析.

全层皮肤黑色素瘤模型(MLNM-FT-A375)透射电镜(TEM). A. 黑素瘤细胞(M)与角质形成细胞(KC)相互作用区域. B. 黑色素瘤细胞与皮下真皮基质相互作用区域(D). N,核,N,核仁. 箭头表示凋亡的黑色素瘤细胞

图3

图3. 含有转移性SK-Mel-28细胞的全层皮肤黑色素瘤模型(MLNM-FT). s - 100抗体染色. 最初,黑色素瘤细胞在真皮/表皮交界处形成小巢(第11天). 随后出现VGP肿瘤(第25天),随后观察到转移至真皮(第29天). 长箭头表示表皮-真皮交界处的黑色素瘤细胞群. 短箭头显示单个黑色素瘤细胞浸润真皮.

图4

图4. N-Cadherin黏附分子在MLNM-FT-A375全层黑色素瘤皮肤模型中的表达. N-Cadherin抗体染色,40X. 注意N-Cadherin表达水平随培养时间的增加而增加.

肿瘤侵袭和抗黑色素瘤药物筛选

e世博官方网站的黑色素瘤组织呈放射状生长, 垂直增长阶段, 转移性黑色素瘤的表型, 平行于体内黑色素瘤的发展. 这个模型为肿瘤学家和癌症研究人员提供了一个有价值的研究工具, 理解, 并开发预防和治疗最严重的皮肤恶性肿瘤之一. 浏览我们的黑色素瘤参考 e世博官方网站参考图书馆 看看医生和研究人员是如何使用我们的黑色素瘤组织的.

 

组织:

工具: 全厚度黑色素瘤皮肤构建(MLNM-FT-A375试剂盒)由24个组织组成. (组织“包”包含组织, 少量培养基, and plasticware; contact e世博官方网站 for specific kit contents.)

基质: 使用单孔组织培养板插入物(e.g. Millicell CM单孔组织培养板插入,孔径= 0.4µm,比表面积= 0.6 cm2).

文化: 最初被淹没,然后在气液界面.

组织学: 上皮:8-12层上皮细胞加角质层(基底层), 尖尖的, and 细粒度的 layers); Dermis: Collagen gel containing fibroblasts. 早期黑色素瘤细胞在真皮/表皮交界处形成结节. 晚期黑素瘤向RGP(径向生长期)进展, VGP(垂直生长阶段)和连续侵入真皮成分.

很多数字: 每周生产的组织批号都有一个特定的批号. 在批号的末尾附加一个字母,以区分给定数量组织中的单个试剂盒. 所有的组织包在细胞方面都是相同的, medium, 处理, 培养条件, 等.

装运: 组织在4°C的培养基中运输,在6孔板中添加琼脂糖凝胶.

装运: 周一. 如有特殊要求,也可于周四装运.

交付: 周二上午,通过联邦快递优先服务(美国). 美国以外:周二-周四,视地点而定.

保质期: 包括运输时间,组织在使用前可在4°C保存3天. 但是,除非必要,不建议延长储存时间. 除了, 如果组织在同一天一致使用,可获得最佳的重现性, e.g. 周二下午或4°C过夜后(周三上午).

长度的实验: 黑色素瘤的发展和进展可持续培养长达4周,并能很好地保留正常表皮形态. Cultures must be fed every other day using e世博官方网站 culture stands (MEL-STND; click on this link for photo) along with 5.0毫升MLNM-FT-MM.

替代组织:

MLNM-FT-A375(6天): 早期MLNM-FT-A375组织. 没有在气液界面培养组织. 客户收到所需的培养基(MLNM-FT-GM)继续培养并生产MLNM-FT-A375. 由于本产品的专利性质,在订购前需要与e世博官方网站技术代表进行讨论. 设计用于研究早期黑色素瘤发展的实验设计要求使用早期组织.

MLNM-FT-EXP: 与MLMN-FT-A375相同,只是e世博官方网站将A375细胞替换为客户提供的黑色素瘤细胞.

细胞:

类型: Human melanoma cells (A375); Normal human epidermal keratinocytes (NHEK); Normal human dermal fibroblasts (NHDF).

来自: 马里gnant melanoma cell line (A375); Neonatal-foreskin tissue (NHEK); Neonatal skin (NHDF);

选择: 人类恶性黑色素瘤细胞SK-Mel-28.

筛选: 艾滋病毒,乙型肝炎,丙型肝炎,支原体.

介质:

基础培养基: MCDB 153基本培养基.

生长因子/激素:表皮生长因子, 胰岛素, 氢化可的松和其他专有的表皮分化刺激剂.

血清: 没有一个.

抗生素: 庆大霉素5µg/ml(庆大霉素正常水平的10%).

抗真菌剂: 两性霉素B 0.25µg / ml.

酸碱指示剂: 酚红(0.0012 g/l).

其他添加剂: 用于增强表皮屏障形成的脂质前体(专有).

分析/维护medium: MLNM-FT-MM用于分析以及MLNM-FT-A375组织的长期维护.

质量控制和无菌:

目视检查: 所有组织都要进行肉眼检查,如果发现有物理缺陷, 组织被拒绝装运.

最终用途检测:保留生产批的组织, 又长了7天, 固定的组织学, 和分析.

不育: 在整个生产过程中使用的所有介质都要进行无菌检查. 维持培养基加或不加抗生素孵育1周,并检查无菌. 用于运输的24孔板上的琼脂糖凝胶也要培养一周,并检查任何污染的迹象.

筛查病原体: 所有的细胞都经过PCR检测,HIV、乙肝和丙肝均呈阴性. 然而,没有一种已知的测试方法可以完全保证细胞是无病原体的. 因此, 这些产品和所有人类衍生产品应按照CDC-NIH手册中建议的BSL-2级别(生物安全级别2)或更高级别处理, “微生物和生物医学实验室的生物安全,” 1998. 如需进一步帮助,请联系您的现场安全主任或e世博官方网站技术服务.

地段失败的通知: 如果一个组织批次没有通过我们的质量控制或无菌测试, 我们会通知客户,并在适当的时候免费更换纸巾. 因为我们的QC和无菌测试是在出货后进行的, 通知将尽快(在正常情况下,无菌故障将在发货后8天内通知).

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