黑种人组织学

组织培养插入
组织培养插入

e世博官方网站的黑色素皮肤系统由正常, 人源表皮角化细胞(NHEK)和黑色素细胞(NHM)培养形成多层, 高度分化的人体表皮模型. 共培养的NHM发生黑色素生成,导致组织色素沉着. 黑种人是使用无血清培养基生产的,没有人工促黑剂,如TPA和IBMX. 培养物在气液界面的组织培养插入物上生长, 可局部使用皮肤美白剂或自美黑剂. 黑种人提供了一个有用的体外手段,以评估化妆品和药物制剂设计的调节皮肤色素沉着.

图1

黑表皮细胞具有与活体相似的形态和超微结构特征,具有一致性和高度可重复性. 位于黑色素真皮基底细胞层的NHM呈树突状,自发产生黑色素颗粒,逐渐填充组织层. 培养时间可达3周, 黑真皮组织色素增多,保留正常上皮形态. Tissues containing NHM derived from black donors show increased pigmentation versus those containing Caucasian-derived or Asian-derived NHM; all three types of cultures are distinctly darker than NHM-free tissues (表皮TM). 局部应用已知的黑色素生成抑制剂可显著减少黑色素生成和肉眼变黑. 相反, 组织内的NHM会对已知的黑色素生成刺激物做出反应, 如α-黑素细胞刺激激素和β-成纤维细胞生长因子, 产生比未经治疗的对照组变黑更快的组织. 近20年来,黑种人的直接分析方法已被纳入实验室的整体测试策略. 有几十个技术参考资料可用, 越来越多的数据表明,黑种人提供了一种廉价和有效的方法来评估皮肤色素沉着,同时避免了物种外推和使用实验动物.

图3

黑种人提供了一种廉价和有效的方法来评估皮肤色素沉着,同时避免了物种外推和使用实验动物. 简单的方案和早期细胞终点的评估使科学家可以在几天内获得数据, 而不是几周或几个月.

皮肤亮

使用SOLVABLE™黑色素分析进行组织中黑色素含量的定量分析. 该方法可用于测试最终化妆品配方的美白功效.

黑种人 (mel - 300a, B, C)使用规程

皮肤亮肤应用说明

色素的研究

黑素真皮已被用于研究皮肤色素沉着的生理机制.

搜索我们的技术参考资料库以获得更多信息.

组织:

工具: 标准黑种人™试剂盒(MEL-300)包含24个个体组织,每个组织直径9毫米. (组织“包”包含组织, 少量培养基, and plasticware; contact e世博官方网站 for specific kit contents.)

基质: 采用化学修饰、胶原蛋白涂层、9 mm ID单孔组织培养板插入.

培养:气液界面.

播种率: NHM:这些地方= 1/10. 1/30的比例可根据要求提供.

组织学: 8-12细胞层(基、棘和颗粒层).

角质层: 10-15层(基于TEM).

很多数字: 每个技术人员每周生产的组织批号都有一个特定的批号. 通常情况下,任何一周的组织产量都有多个批号. 在批号的末尾附加一个字母,以区分给定数量组织中的单个试剂盒. 所有的组织包在细胞方面都是相同的, medium, 处理, 培养条件, 等.

装运: 4°C中补充琼脂糖凝胶,24孔板.

装运: 每星期一. 周四发货,也可根据特殊要求.

交付: 周二上午,通过联邦快递优先服务(美国). 美国以外:周二至周三,视地点而定.

保质期: 包括运输时间,组织在使用前可在4°C保存6天. 但是,除非必要,不建议延长储存时间. 除了, 如果组织在同一天一致使用,可获得最佳的重现性, e.g. 周二下午或4°C过夜后(周三上午).

长度的实验: 可持续培养至少2周,表皮形态保持良好. 培养物必须每隔一天用5.0ml新的维护介质(EPI-100-NMM-3)或epi - 100 nmm - 113.  细胞培养插入物悬挂顶板(HNG-TOP-12,提供),允许使用5.0 mL. 

替代组织:

MEL-300-A(或-B或-C)-每个: 和MEL-300一样,只是只有一个组织,而不是24个组织.

mel - 300a(或-B或-C) -FRZN-EA: MEL-300-B组织经过3次冷冻/解冻循环. 设计用来作为黑色素分析的对照.

Mel-301 (-a, -b, -c): 培养3天小于MEL-300,分化程度低于MEL-300

Mel-312 (-a, -b, -c): 与MEL-300 (-A, -B, -C)相同,只是每个试剂盒有12个组织而不是24个.

Mel-606 (-a, -b, -c): 和MEL-300 (-A)一样, -B, -C)每包6张纸巾除外, 每个组织培养在一个更大直径的细胞培养插入物(ID = 22毫米).

Mel-300-ft (-a, -b, -c): Full-thickness human skin tissue model composed of fibroblast-containing collagen matrix (dermis); normal human epidermal keratinocytes, 正常的人类黑色素细胞(表皮). 每包24张纸巾.

细胞:

类型: a) Normal human epidermal keratinocytes (NHEK); b) Normal human melanocytes (NHM).

基因组成: NHEK和NHM属于个体,但捐赠者不同. 组织包含匹配的NHEK和NHM可根据特殊要求.

民族起源: 来自高加索的含有NHM的黑色素真皮(MEL-300-C), 非裔美国人(梅尔- 300 b), 还有亚洲(MEL-300-A)捐助者.

来自: Neonatal-foreskin组织.

选择: 数量有限的NHEK菌株 & 来自成人乳房组织的NHM.

筛选: 艾滋病毒,乙型肝炎和丙型肝炎.

介质:

基础培养基: 杜尔贝科改良Eagle中型(DMEM).

生长因子/激素: 表皮生长因子, 胰岛素, 氢化可的松, 和其他专有的表皮分化刺激剂.

血清: 没有一个.

抗生素: 庆大霉素5µg/mL(庆大霉素正常水平的10%).

抗真菌剂: 两性霉素B 0.25µg / mL.

酸碱指示剂: 酚红.

其他添加剂: 用于增强表皮屏障形成的脂质前体(专有).

选择: 苯酚red-free(梅尔- 300 b -脉冲重复频率), 不需抗生素(梅尔- 300 b -沛富), anti-fungal-free(梅尔- 300 b -等于off), 和无氢化可的松培养基和组织(MEL-300-B-HCF)是可用的. 代理至少在发货前3天被移除.

维护中: 推荐使用三种维护介质.

在长期的实验中,色素和组织学是重要的, 使用EPI-100-NMM-3, epi - 100 nmm - 113, 推荐使用epi - 100 - llmm - 3所示.

EPI-100-NMM-3 (New Maintenance Medium)包含的KGF可以保存组织,但不包含任何直接促进色素沉着的因素.

epi - 100 nmm包含KGF - 113, βfgf, 和α-MSH,并促进色素沉着和组织学保留.

长寿命维护中, epi - 100 - llmm - 3所示, 含有大量的α-MSH和βfgf, 还含有与EPI-100-NMM-3和EPI-100-NNM-113相同水平的KGF. 组织在LLMM-3中变暗最快,在NMM-113中变暗较慢,在NMM-3中变暗最快.

在培养物中加入5.每48小时0 mL培养基.

质量控制和无菌:

目视检查: 所有组织都要进行肉眼检查,如果发现有物理缺陷, 组织被拒绝装运. 选择的组织用显微镜检查,以确保黑素细胞是可见的(对于MEL-300-B和MEL-300-A组织),并且它们均匀地分布在整个组织中.

最终用途测试: 组织继续在培养中,以确保组织发生宏观变暗. 组织暴露于1% Triton X-100 5小时. 每批组织的5小时存活率必须超过35%,由MTT法测定(见e世博官方网站表皮™ET-50方案).

不育: 在整个生产过程中使用的所有介质都要进行无菌检查. 维持培养基加或不加抗生素孵育1周,并检查无菌. 用于运输的24孔板上的琼脂糖凝胶也要培养一周,并检查任何污染的迹象.

筛查病原体: 所有的细胞都经过PCR检测,HIV、乙肝和丙肝均呈阴性. 然而,没有一种已知的测试方法可以完全保证细胞是无病原体的. 因此, 这些产品和所有人源性产品应按照CDC-NIH手册中建议的BSL-2级别(生物安全级别2)或更高级别处理, “微生物和生物医学实验室的生物安全,” 1998. 如需进一步帮助,请联系您的现场安全主任或e世博官方网站技术服务.

地段失败的通知: 如果一个组织批次没有通过我们的质量控制或无菌测试, 我们会通知客户,并在适当的时候免费更换纸巾. 因为我们的QC和无菌测试是在出货后进行的, 在正常情况下,我们会尽快通知你, %生存能力失败将在周三下午5点前通知.m.; sterility failures will be notified within 8 days of shipment).

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