上皮归还

外肠组织模型可用于测试候选药物或生物制剂,以治疗以小肠上皮屏障损伤为特征的疾病.

该模型

Epi肠是一种三维重建的组织模型, 人细胞来源的小肠上皮、内皮细胞和成纤维细胞. 高度分化的组织模型是在易于处理的组织培养插入物的气液界面(ALI)产生的. 组织模型的结构分析显示柱状的基底细胞和Kerckring褶皱. 超微结构的, 表肠显示刷状边界, 功能紧密连接和粘液分泌颗粒, 类似于体内组织.

外肠组织模型组织学图像

图1

超微结构分析: 体外表肠的透射电镜(TEM) (A) 和外植体组织 (B) 显示刷状边界(位于肠上皮细胞的管腔极)和紧密连接. Brush border – provides digestive 和 absorption surface; site for enzymes & 转运蛋白.

Eurotox归还共焦

共焦显微图像显示:A) partial thickness (PT; epithelial cells only) 和 B) 全层(英国《e世博官网》, 含成纤维细胞和内皮细胞(红色箭头)微孔膜培养的小肠组织模型, 在ALI条件下插入14天.

图1 b

该方法

正常人原代小肠上皮细胞, 成纤维细胞, 单层培养扩增内皮细胞,将内皮细胞接种到透明微孔膜支架上,重建3D SMI组织. 用1或2 mm活检穿刺机对3D组织进行损伤诱导. 每天使用相差显微镜对损伤组织进行上皮修复分析, 移行上皮细胞(细胞角蛋白19免疫染色)和成纤维细胞(波形蛋白免疫染色)的共聚焦成像, 上皮间上皮电阻(TEER)测量监测上皮屏障完整性的恢复, 和H&E染色检测创面闭合和再上皮化水平.

结果

损伤后,SMI组织的TEER从160 Ω*cm2(基线)下降到55 Ω*cm2. 受伤后的第一天, 成纤维细胞在伤口区域变得更加明显,表皮细胞开始迁移到伤口区域. 共焦和H&损伤组织的E显像显示成纤维细胞和上皮细胞在创面愈合过程中相互配合. 未被上皮细胞重新封闭的伤口最初被成纤维细胞覆盖. 总的来说,伤口愈合在4-6天内完成. 第4 ~ 6天:1)迁移的上皮细胞重新封闭创面,迁移的上皮细胞再次极化(经共焦成像和H&2)组织屏障恢复到损伤前基线水平(TEER).

图1
免疫组化显示针尖伤后器官型3D Epi肠 (SMI-100-FT)组织恢复(0.直径5毫米). 承担伤口的上皮细胞迁移,重新封闭受伤的组织. 移行上皮细胞表达细胞角蛋白19(红色, see arrow); nuclei are stained with DAPI (Blue). 注:未应用任何治疗来加强恢复过程.

图2

伤口愈合进展: 免疫组化显示针尖伤后器官型3D Epi肠 (SMI-100-FT)组织恢复(0.直径5毫米). 承担伤口的上皮细胞迁移,重新封闭受伤的组织. 移行上皮细胞表达细胞角蛋白19(红色, see arrow); nuclei are stained with DAPI (Blue). 注:未应用任何治疗来加强恢复过程.

图3

 

伤口愈合: 用2mm活检穿刺针在伤后3天重建SMI-100-FT组织模型. 移行上皮细胞细胞角蛋白19染色(红色), 波形蛋白成纤维细胞(绿色), 细胞核用DAPI染色(蓝色). 第三天,成纤维细胞处于重新封闭伤口的边缘.

图4

障恢复: TEER测量显示损伤后上皮屏障完整性恢复.

图5

伤口愈合进展: H&E染色显示肠外组织模型上皮细胞恢复. 箭头所示为迁移性上皮细胞.

结论

新开发的SMI组织模型可用于测试以小肠上皮屏障损伤为特征的疾病的候选药物.

有关详细信息,请查看 Epi肠 参考文献.